马钱子又名番木鳖，始载于《本草纲目·卷十八》，是马钱科植物马钱(Strychnou nux-vomica L.)的干燥成熟种子，具有通络止痛、散结消肿之功效，马钱子碱（Brucine）、士的宁（Strychnine）等吲哚类生物碱成分是其主要的有效成分。
马钱子具有确切的抗肿瘤作用，目前的研究表明，马钱子生物碱类成分具有确切的抗肿瘤效果[1]；而采用脂质体作为载体能够显著提高马钱子生物碱的抗肿瘤作用。
隐形脂质体（stealth liposome），又称为长循环脂质体，是利用二硬脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）对脂质体进行表面修饰，显著提高亲水性，通过有效避免网状内皮系统巨噬细胞的摄取，提高药物的肿瘤靶向性以改善药效。目前国外上市的抗肿瘤药物脂质体制剂如阿霉素脂质体等都应用了隐形脂质体技术，并证实能进一步减毒增效。
马钱子（主要有效成分同时也是毒性成分为生物碱）作为“以毒攻毒”的传统代表药物广泛应用于癌症的临床治疗，具有确切的抗肿瘤效果且没有免疫抑制作用，此外还具有镇痛抗炎作用可同时治疗癌性疼痛，可以“多管齐下”地治疗癌症。但其强烈的中枢神经毒性严重限制了临床应用的安全性。
脂质体作为马钱子生物碱的载体已被证明能够显著地增强其抗肿瘤效果。但到目前为止，仅有用于马钱子碱单体成分载体的研究报道且未见急性毒性方面的比较研究。脂质体作为中药成分的载体研究目前有两大问题：①主要包裹中药单体活性成分。中药的特色之一在于多成分多靶点协同作用，中药单成分脂质体本质上与西药脂质体没有区别，并不能体现出中药的优势。②多为普通脂质体作为中药成分载体的报道，第二代隐形脂质体技术还很少应用于中药领域。因此，我们用隐形脂质体作为马钱子总生物碱有效部位的载体尝试解决以上两个问题。
1 马钱子的炮制（砂烫法）
取洁净细砂，置铁锅中，加热至230℃左右（用温程400℃的温度计距锅底3mm处测量），投入马钱子，掩盖片刻，然后不断翻动，约3min，至马钱子鼓起爆裂并呈棕黄色时迅速出锅。
2 马钱子总生物碱的含量测定
精密吸取样品溶液0.5mL，真空干燥除去溶剂，分别加入pH7.2浓度为0.25mg/mL的溴麝香草酚蓝显色液和6mL氯仿，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗，静置6h，分取氯仿层，416nm测定吸光度，计算以马钱子碱计总生物碱的含量。含量测定的标准曲线及相关方法学验证已另文报道。
3 马钱子总生物碱的提取[5]
取马钱子制品粉末（过20目筛，45℃干燥6h）约10g，精密称定重量，加15%氨水1mL湿润，密塞静置3h，加氯仿50mL，置40℃恒温水浴振荡器中振荡提取12h，提取液过滤，残渣+15%氨水1mL+氯仿50mL，重复恒温水浴振荡提取共5次。合并提取液，减压回收氯仿浓缩并定容至50mL。
4 总生物碱纯化工艺的考察
精密吸取50mL氯仿提取液，真空干燥得提取物，精密称重。用50mL（3→100）硫酸超声溶解，4000rpm离心10min，取上清液，用40%NaOH调pH到12.0，用25mL氯仿萃取5次，合并氯仿液，减压回收氯仿，浓缩后用氯仿定容至50mL。
分别重复以上纯化步骤0、1、2、3次后，从50mL氯仿提取液中精密吸取0.1mL用氯仿稀释至5mL，从中精密吸取0.5mL采用2.2项下方法测定以马钱子碱计的总生物碱含量并折算50mL氯仿提取液中的总含量，剩余的氯仿提取液减压回收溶剂并真空干燥得提取物，精密称重。以测定的总生物碱含量与提取物总重的比值计算纯度。
结果见表1。可见纯化三次后，总生物碱的纯度基本满意。因此将制得的提取物纯化三次后制得总生物碱，并用于制备隐形脂质体。
表1 马钱子总生物碱提取物的纯度
5 马钱子总生物碱隐形脂质体的制备与性质考察
（1）制备 按摩尔比55∶45：5称取磷脂、胆固醇和DSPE-PEG2000，加入无水乙醇，适当超声使其溶解，以5 mL/min的速度注入磁力搅拌的硫酸铵溶液中，减压蒸发除去乙醇，探头超声匀化后，微孔滤膜过滤，用pH7.4PBS透析除去外水相硫酸铵，制得空白隐形脂质体。取马钱子总生物碱提取物，加入适量空白隐形脂质体中，恒温磁力搅拌，即得马钱子总生物碱隐形脂质体，浓度为0.25mg/mL。除了膜材中没有DSPE-PEG2000外，其余同法操作，即得同浓度的马钱子总生物碱普通脂质体。
（2）粒径 取脂质体混悬液，用重蒸水稀释至适宜浓度，用Zetasizer测定仪测定马钱子总生物碱普通脂质体和隐形脂质体的粒径。结果如图1。马钱子总生物碱普通脂质体和隐形脂质体的平均粒径分别为163.4nm和106.5nm，多分散系数分别为0.22和0.08。可见隐形脂质体的粒径明显减小，且更加均匀。
图1 马钱子总生物碱普通脂质体（A）与隐形脂质体（B）的粒径分布图
（3） 洗脱曲线的绘制 精密吸取马钱子总生物碱隐形脂质体、普通脂质体各0.5 mL分别上SephadexG-50柱（1×27cm）用pH7.4PBS洗脱，流速1mL·min-1，每份2mL，共收集18份；每份加破膜剂（异丙醇：无水乙醇=4：1，v/v）2mL，混匀，以PBS液∶破膜剂（1∶1）的混合溶液为空白，在260nm处测定吸光度，绘制洗脱曲线。如图1。可见脂质体和未包封的游离药物可以实现完全分离，第1~7管为含药脂质体，第8~16管为游离药物。
图2 马钱子总生物碱普通脂质体与隐形脂质体的洗脱曲线
（4）包封率的测定 精密吸取马钱子总生物碱隐形脂质体、普通脂质体各0.5 mL分别上柱洗脱，收集含药脂质体和游离药物。游离药物部分用10mL氯仿反复萃取3次，合并氯仿液，减压浓缩并定容至2mL，从中精密吸取0.5mL按2.2项下测定总生物碱浓度并计算游离部分按马钱子碱计的总生物碱含量，计算包封率。包封率=（总生物碱投药量-游离部分总生物碱含量）/总生物碱投药量×100%。其中总生物碱投药量为按马钱子碱计的总生物碱含量。0.25mg/mL马钱子总生物碱隐形脂质体和普通脂质体的平均包封率分别为80.97%和73.01% （n=3）。可见隐形脂质体的包封率优于普通脂质体。
