马钱子为Strychnos nux-Vomica L.的干燥种子，具解毒，散结，活络，止痛的功效。马钱子有大毒，其内含主要成份士的宁既是有效成份，又是有毒成份。成人口服5~l0mg士的宁就会中毒，口服7粒马钱子或30mg士的宁就会死亡。所以临床上常用的马钱子一般需要炮制后方可入药，笔者已从炮制前后的马钱子中提取分离了23个化合物，并确定了其中16个生物碱的结构。通过不同的温度加热反应发现士的宁与马钱子碱的氮氧化物经炮制后其含量大增，这可能分别是由士的宁和马钱子碱转化而来。为了比较上述两个氮氧化物与士的宁和马钱子碱的药效的强弱及毒性的大小，拟对这两个氮氧化物进行药理和毒理试验，但提取分离氮氧化物成本高，周期长，因此，进行了半合成的研究，结果得到了纯度较好，得率较高的上的宁和马钱子碱的氮氧经物，并对其稳定性进行了研究。
1氮氧化物的半合成
分别取士的宁和马钱子碱各2g，精密称定，分别置具塞三角烧瓶中，加无水乙醇150ml，精确加入过氧化氢5ml使其溶解，置磁力搅拌器60℃加热搅拌1h，用薄层层析法检查，待反应完全后，置旋转薄膜浓缩仪减压浓缩，得到无色针状结晶。
2氮氧化物的还原性试验
分别取马钱子碱和士的宁的氮氧化物10mg，精密称定，分别溶于20ml蒸馏中，加重10滴10％亚硫酸氢钠溶液(新鲜配制)，于60℃水浴加热5~10min，静置冷却后，分别用薄层层析法进行检测。
3薄层层析的检测鉴别
用10μl微量进样器，分别吸取一定量的氮氧化产物和还原试验产物，在GF254薄层板上单独点样，用士的宁，马钱子碱，士的宁氮氧化物标准品作对照，用三种不同展开剂展开。A展开剂：乙醚－乙醇－二乙胺(8：2：03)；B展开剂：乙酸乙酯－甲醇－二乙胺(8：3：0.4)，C展开剂：甲醇－水(8：2)。结果见图1。
图1 半合成士的宁、马钱子碱氮氧化物薄层层析检测图
1、士的宁 2、士的宁氮氧化物 3、半合成士的宁氮氧化物
4、马钱子碱 5、马钱子碱氮氧化物 6、半合成马钱子碱氮氧化物
另以两种检品混合点样，观察其斑点形状，Rf值及认为是相同的成份斑点是否重叠等。以进一步判断化合物的异同，见图2。
图2 士的宁、马钱子碱氧化还原产物薄层层析检测图
1、士的宁+士的宁氮氧化物 2、士的宁氮氧化物+半合成士的宁氮氧化物
3、马钱于碱+马钱于碱氮氧化物 4、马钱子碱氮氧化物+半合成马钱子碱氮氧化物
5、士的宁氮氧化物+其还原反应物 6、马钱子碱氮氧化物+其还原反应物
7、马钱子碱的氮氧化物的还原反应物
4 含量测定
(1)绘制工作曲线：精密称取标准品适量，分别置10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度。用微量进样器精密吸取士的宁氮氧化物标准液(3、4、5、6、7μL，马钱子碱氮氧化物标准液(3、4、5、6、7μL)。分别在GF254硅胶板上点样，(10×20cm)，并用展开剂乙酸乙酯－甲醇－二乙胺(8：3：0.4)展开，展距12cm，取出晾干，用双波长薄层扫描仪进行测定，测定波长士的宁氮氧化物255nm，马钱子碱氮氧化物为270nm，反射锯齿扫描Sx=3，根据标准品浓度及峰面积值进行线性回归。
表1 标准品工作曲线回归方程
(2)样品测定
精密称取样品适量，分别置10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，士的宁氧化反应物浓度为0.92mg／ml，马钱子碱氧化反应物浓度为1.14mg／ml，用微量进样器分别精密吸取上述样品各5μl按标准曲线制作的同样条件进行薄层层析并扫描定量，由回归方程得Cx，再由计算公式：含量(％)=Cx／0.5Ws·100(Ws为样品称样量)。可得士的宁氮氧化物含量为92.25％，马钱子碱氮氧化物的含量为94.90％。
(3)回收率试验
取半合成士的宁氮氧化物和半合成马钱子碱氮氧化物适量，精密称定，再分别加经精密称定的士的宁和马钱子碱氮氧化物标准品各10mg，用无水乙醇溶解，并定容至100.00mL，分别在两块GF254(10×20cm)板上点样，士的宁氮氧化物和马钱子碱氮氧化物标准品均各点3μl，4μl，其半合成氮氧化物各为6μl，6μl，6μl，其中一点6μl中不加入标准品作空白对照，用B展开剂：乙酸乙酯－甲醇－二乙胺(8：3：0.4)展开，晾干进行扫描测定，采用外标两点法计算浓度，用加样回收法计算回收率，结果见表2。
表2 在氮氧化物中加入标准品的回收率测定
(4)稳定性试验
将半合成的士的宁氮氧化物和马钱子碱氮氧化物分别在GF254薄层板上点样，展开后每隔一定时间用薄层扫描仪测定，结果见表3。
表3 半合成氮氧化物稳定性试验结果
士的宁氮氧化物及马钱子碱氮氧化物半合成反应方程式见图3。
图3 士的宁及马钱子碱氮氧化物的半合成
Strychnine：R'=R=H Strychnine N-oxide：R'=R=H
Brucine：R'=R=OCH3 Brucine N-oxide：R'=R=OCH3
注：虚线箭头表示马钱子碱氮氧化物的还原
